表觀遺傳學(xué)是研究在基因的核苷酸序列不發(fā)生改變的情況下，基因的表達(dá)和調(diào)控的可遺傳變化的一門遺傳學(xué)分支學(xué)科。表觀遺傳的現(xiàn)象很多，比如RNA介導(dǎo)的基因沉默，組蛋白修飾，DNA甲基化等。其中，DNA的甲基化作為高等真核生物中一個(gè)主要的表觀遺傳學(xué)機(jī)制，被廣泛研究。

近年來(lái)涌現(xiàn)出很多 DNA 甲基化的檢測(cè)技術(shù)，常用的DNA甲基化檢測(cè)方式主要是基于亞硫酸鹽修飾預(yù)處理的甲基化檢測(cè)技術(shù)。

(重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化原理)

天根生化針對(duì)DNA甲基化研究中的DNA重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化開發(fā)一款全新試劑盒。

DNA重亞硫酸鹽快速轉(zhuǎn)化試劑盒（離心柱型）（DP225）

簡(jiǎn)單快速：轉(zhuǎn)化和純化流程可在2 h內(nèi)完成，對(duì)儀器設(shè)備要求較低，操作簡(jiǎn)便。

轉(zhuǎn)化率高：DNA樣品中未甲基化胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶的轉(zhuǎn)化率可達(dá)99.5%以上。

反應(yīng)靈敏：DNA樣品適用濃度范圍在500 pg~2.5 μg之間。

完整度高：處理后的DNA完整度好，得率高。

普適性好：本試劑盒處理后的DNA樣品適用于甲基化特異性PCR，測(cè)序法及芯片法等后續(xù)甲基化分析方法。

實(shí)驗(yàn)流程

重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化

1. Bisulfite Mix-L3干粉溶解

2. 重亞硫酸鹽反應(yīng)體系配制

3. 重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化循環(huán)條件

表1重亞硫酸鹽反應(yīng)體系

表2重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化循環(huán)條件

重亞硫酸鹽處理后的 DNA純化

DP225  實(shí)驗(yàn)案例一

轉(zhuǎn)化時(shí)間和轉(zhuǎn)化試劑體積對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響

DNA重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化試劑盒轉(zhuǎn)化率評(píng)估實(shí)驗(yàn)流程

重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化循環(huán)條件

轉(zhuǎn)化時(shí)間和轉(zhuǎn)化試劑體積對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)論：

用天根DNA重亞硫酸鹽快速轉(zhuǎn)化試劑盒DP225轉(zhuǎn)化1 μg Human Genome DNA+10 ng λ DNA，比較了不同轉(zhuǎn)化試劑體積（100 μl和120 μl）和不同轉(zhuǎn)化時(shí)間（50 min (2 cycles), 75 min (3 cycles)和100 min (4 cycles)）對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響，轉(zhuǎn)化率通過(guò)NGS方法評(píng)估（流程見上表）。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)化試劑體積為120 μl時(shí)，相比100 μl得到更高的轉(zhuǎn)化率；轉(zhuǎn)化時(shí)間為100 min (4 cycles)時(shí) ，相比于更短的轉(zhuǎn)化時(shí)間（50 min (2 cycles)和75 min (3 cycles)），得到更高的轉(zhuǎn)化率。

不同品牌的同類產(chǎn)品轉(zhuǎn)化率比較

DNA重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化試劑盒轉(zhuǎn)化率評(píng)估實(shí)驗(yàn)流程

不同品牌的DNA重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化試劑盒的轉(zhuǎn)化率比較

實(shí)驗(yàn)結(jié)論：

用天根DNA重亞硫酸鹽快速轉(zhuǎn)化試劑盒DP225和國(guó)際主流品牌同類產(chǎn)品轉(zhuǎn)化1 μg Human Genome DNA+10 ng λ DNA，比較各產(chǎn)品的轉(zhuǎn)化率，轉(zhuǎn)化率通過(guò)NGS方法評(píng)估（流程見上表）。結(jié)果顯示，DP225具有高的轉(zhuǎn)化率，性能與國(guó)際品牌相當(dāng)甚至更優(yōu)。

PyroSequencing焦磷酸測(cè)序

Sanger測(cè)序

建庫(kù)測(cè)序、捕獲測(cè)序、芯片、panel

甲基化特異性PCR-EM101

高分辨率熔解曲線分析-FP210

探針?lè)╭PCR-FP211,FP206